微生物检验注意事项有哪些

　　微生物检验是临床诊疗、食品安全及环境监测的重要技术支撑。生物学、分子学、免疫学等检验方法各具特色，但在实际操作中需严格遵守技术规范。如人们想完成微生物检验，都有哪些注意事项呢?

　　生物学检验

　　1.标本采集和运送

　　在临床微生物检验工作中，标本的正确选择、采集和运送是保证检验质量的重要环节，是实验室工作准确和有效的基本前提。以常见的血液细菌培养为例：采血要求：①采血时间：在使用抗生素前、患者寒战时或在发热初期采血;②消毒要求：用消毒三步法对患者皮肤和培养瓶口进行消毒;③采血量：成人每瓶血量8-10ml，儿童每瓶血量3-5ml;④采血瓶数：成人在不同部位各采血两瓶。

　　运送要求：①已经采集的血培养瓶必须立即送检;②如不能立即送检，不可放冰箱保存，需在室温放置，但不能超过2小时。

　　2.培养基选择

　　如血液细菌培养瓶中有细菌生长，需转种到培养基上，根据报阳血液直接涂片的革兰染色初步结果、临床信息及实验室条件，需针对性选择转种培养基，以确保病原体的有效分离与鉴定。

　　普通细菌一般选择血琼脂平板、巧克力平板和麦康凯平板的基础培养基组合，特殊病原体如厌氧菌、真菌和军团菌等，需对应选择厌氧血平板、沙保罗平板和BCYE平板。

　　分子学检验

　　分子生物学检验(如PCR、基因测序、核酸定量等)对样本的质量要求极高，样本采集和运送过程是关键。以新冠病毒核酸检测标本为例：

　　1.标本采集和运送

　　采集鼻咽拭子要求：①样本采集人员做好个人防护;②稍微用力在鼻或咽部来回擦拭至少3次;③将拭子头折断浸入保存管的病毒保存液中;④严格无菌操作，避免污染。

　　运送要求：①在2小时内送检，短期(24小时内)可4℃保存;②样本采用三层包装(样本管+密封袋+防震外箱)，符合UN3373生物安全标准;③在转运过程中使用干冰或冰袋保证样本处于低温中。

　　2.技术关键

　　分子检测对实验室环境的要求极为严格，目的是为了防止交叉污染，避免出现假阳性结果和生物安全风险。

　　实验室要严格分区，利用负压梯度使得空气从清洁区向污染区方向流动，人员和物品的流动方向也和空气流一致，每天进行环境清洁与消毒，每日使用10%含氯消毒剂或核酸清除剂擦拭台面和设备，紫外灯照射空气60分钟以上，这样可有效防止污染。

　　工作人员在技术上采取防核酸污染的措施有①分装试剂够当天用量，避免污染;②在生物安全柜内处理样本;③使用带滤芯的吸头;④避免剧烈混匀样本;⑤做内参基因对照和阴阳性对照。

　　免疫学检验

　　1.标本采集和运送

　　标本多是血清样本，采样过程中避免溶血，室温静置30分钟后再离心。

　　2.检测环节注意

　　试剂按说明书要求保存，避免反复冻融;控制好反应条件，包括实验室的温度湿度，反应时间长短和反应板的无残留;排除是否存在标本脂血溶血、钩状效应等干扰因素。

　　生物安全注意事项

　　1.实验室分级管理

　　严格遵循生物安全等级管理要求，决不能超等级进行病原体的实验活动。

　　2.个人防护装备规范

　　按照实验室的生物安全等级和实验活动的风险等级，选择对应安全级别的个人防护装备。

　　3.规范消毒灭菌

　　按照污染程度采用不同浓度的含氯消毒剂进行工作台面、地面和仪器表面的消毒，根据不同的物质性质采用不同的消毒灭菌方法如高压灭菌、高温灭菌和紫外线消毒等。

　　4.废弃物处置

　　按要求对感染性废物进行高压灭菌后，装入黄色双层医疗垃圾袋中，鹅颈结打包后移出实验室，并按规定进行交接和登记。

　　5.人员培训

　　实验室和相关工作人员需定期接受各种生物安全相关培训，培训合格后方可上岗。

　　结语

　　微生物检验需严格规范标本采集和运送，实验全程遵循生物安全管理规定。同时要建立标本泄露和职业暴露等应急处置预案并定期演练，保障检验结果的准确性及人员和环境的安全。