临床微生物学检验技术知多少

　　西安经开妇幼医院检验科 杨瑞利

　　临床微生物学检验技术是指利用微生物学基础理论与技能，掌握各类临床微生物特性，通过系统的检验方法，对临床样本进行病原微生物检测和鉴定的技术。这类技术可为临床感染性疾病的诊断、治疗和预防提供实验依据。临床微生物包括细菌、病毒、真菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体及寄生虫，下面主要介绍最常见病原微生物细菌检验技术的相关知识。

　　1.形态学检查

　　该项技术是细菌检验中的重要方法之一,也是细菌分类及鉴定的基础，根据细菌的形态、结构及染色反应性等，为进一步鉴定提供重要的参考依据。

　　1.1不染色标本检查

　　不染色标本一般用在仔细观察细菌形态及运动状况。未染色细菌呈无色,主要依靠折光率和周围环境来有效区别。有鞭毛的细菌运动格外活泼，没有鞭毛的细菌呈不规则布朗运动。弧菌、螺旋体及弯曲杆菌等细菌形态与运动方式特征较为明显，且还有极其重要的诊断意义。常用检查方法包括压滴法、悬滴法及毛细管法。

　　1.2染色标本检查

　　在普通的光学显微镜下，可以观察到染色标本中细菌的形态与结构，并且还可根据染色反应性对细菌进行分类鉴定。也可根据检测目的选择相应的染色方法，就比如观察普通细菌选用革兰染色、观察分枝杆菌选用抗酸染色或金胺O染色法、观察隐球菌通过墨汁染色法。

　　2.细菌分离培养及鉴定

　　2.1分离培养

　　以往传统的细菌检验前提条件就是获得纯培养菌落。所以，选择合适的培养方法很重要，大部分细菌还可以通过人工方法进行培养。根据待检样本的性质、培养目的以及所需培养基种类采用不同的接种方法。常用接种方法包括平板划线分离培养法、琼脂斜面接种法、穿刺接种法、液体培养基接种法、倾注平板法以及涂布接种法等。细菌的培养方法分为需氧培养、二氧化碳培养、微需氧培养以及厌氧培养4种，根据不同的标本以及不同的培养目的来有效选择合适的培养方法。

　　2.2生化反应

　　在病原体鉴定过程中，时常依据病原体对营养物质的分解能力及其代谢产物的差异进行有效区分及鉴定，常用生物化学试验有糖代谢试验、蛋白质和氨基酸代谢试验、碳源和氮源利用试验、酶类试验以及其他生化试验，就比如胆汁溶菌试验。

　　现如今，已经有多种微量、快速的细菌生化反应试剂盒以及半自动或全自动检测仪器广泛应用于临床。不仅快速准确，还能简化工作步骤，并减轻了人力及缩短了检验流程。不管是半自动、全自动仪器，或者手工微量反应管，还是生化反应试剂，都必须进行严格的质量控制，确保结果的准确性。

　　2.3抗生素敏感性试验

　　主要适用于细菌鉴定，如新生霉素、杆菌肽、optochin敏感性试验等，应用时需要注意纸片药物含量，例如杆菌肽有10μg和0.04μg两种规格，应用在化脓性链球菌鉴定是0.04μg规格，定期用质控菌株进行质量控制。

　　3.细菌的免疫学检测方法

　　免疫学检测指的是通过检测抗原或抗体确定患者是否感染，或者对感染与免疫接种的免疫应答，免疫学方法诊断感染性疾病的实质是检测微生物具有抗原性质的组分，或者检测非自身蛋白相应的特异性抗体。

　　3.1凝集反应

　　主要适用于细菌鉴定的凝集反应，包括玻片法凝集试验、反向间接血凝试验、胶乳凝集试验以及协同凝集试验。玻片法凝集试验具有简单、易行、特异性强等特点，主要用于鉴定菌种和分型，如伤寒沙门菌属、痢疾志贺菌属、霍乱弧菌等细菌的鉴定与分型;反向间接血凝试验具有敏感性高、反应快、结果易于观察的优点，常用于脑膜炎奈瑟菌、布鲁菌、鼠疫耶尔病菌、炭疽芽胞杆菌等细菌的鉴定;乳胶凝集试验敏感度虽然不如反向间接血凝试验，但是具有操作简便、反应快、敏感性高的优势，所以被临床广泛应用。

　　3.2免疫荧光技术

　　该项技术是用荧光素标记的抗体检测抗原或抗体的免疫学标记技术，也称之为荧光抗体技术，常用方法的有直接法、间接法以及免疫荧光菌球法，该技术大大提高了检测的敏感性。

　　3.3酶联免疫吸附试验

　　该技术是临床细菌检验中应用最广泛的免疫学技术,有着较高的特异性和敏感性，无须使用特殊设备，结果观察简便,常用方法为双抗体夹心法和竞争法，双抗体夹心法常用于某种细菌抗原或鉴定菌型。

　　3.4免疫印迹技术

　　该技术不仅能应用于分析抗原组分，且还能应用于疾病诊断。

　　4.细菌的分子生物学检测和鉴定

　　随着细菌分子生物学技术的快速发展与完善，为微生物的鉴定提供了新的实验手段，使得诊断更加快速、简便及准确。

　　4.1核酸杂交技术

　　该项技术是应用放射性核素或生节、地高辛、辣根过氧化物酶等非放射性物质标记的已知序列核酸单链作为探针，在特定条件下，按照碱基互补原则与待测标本的核酸单链退火形成双链杂交体。常用DNA探针杂交方法包括液相、固相和原位杂交。

　　4.2靶核酸扩增技术

　　该项技术是一种选择性DNA或RNA片段在体外的扩增技术，在体外数小时后就可扩增同一基因序列上百万倍，有快速、灵敏以及特异性较强等特点，主要适用于特殊耐药基因，就比如耐甲氧西林、金黄色葡萄球菌等检测。

　　4.3生物芯片技术

　　该项技术是近几年来生命科学领域中发展较为迅速的一项高新技术。通过微加工技术以及微电子技术，在固体芯片表面建立微型生物化学分析系统，实现对细胞、蛋白质、DNA、其他生物组分等的快速、准确检测。常用生物芯片有基因芯片和蛋白芯片。病原性细菌诊断芯片可以在一张基因芯片上同时对多个样本进行多种病原菌的检测，仅用极少量的生物分子，快速、准确地获取样品中的生物信息。

　　总之，临床微生物检验技术对临床诊疗有重要的意义，通过了解和规范地应用这些技术，可以快速、准确地鉴定病原微生物信息，帮助临床为患者提供更有效和个性化的治疗方案，进一步提高治疗效果和病人的生活质量。